محیط کشت XLD آگار
محیط کشت XLD آگار (Xylose Lysine Deoxycholate Agar) یک محیط افتراقی نسبتاً انتخابی است که برای جداسازی و تمایز پاتوژن های گرم منفی روده ای، به ویژه سالمونلا و شیگلا در نمونه های بالینی، محیطی و غذایی استفاده می شود. این بر اساس تخمیر زایلوز، لاکتوز و ساکارز، دکربوکسیلاسیون لیزین و تولید سولفید هیدروژن برای تمایز اولیه شیگلا و سالمونلا است.
XLD agar، یکی از محیط هایی است که در فارماکوپه آمریکایی (USP) و اروپایی (EP) برای شمارش میکروارگانیسم‌ها توصیه می‌شود.
ترکیبات و آماده سازی XLD Agar
اجزای تشکیل دهنده را در آب معلق کنید (53 گرم در 1000 میلی لیتر آب تصفیه شده / مقطر)، حرارت دهید، مرتباً هم بزنید تا زمانی که محیط شروع به جوشیدن کند (بیش از حد گرم نکنید و اتوکلاو نکنید).
بلافاصله به یک حمام آب با دمای 50 درجه منتقل کنید، به هم زدن ادامه دهید تا محیط تا حدود 50 درجه خنک شود و در ظروف پتری استریل بریزید.
| gram / liter | Ingredients | gram / liter | Ingredients |
|---|---|---|---|
| 5gr | Sodium chloride | 3gr | Yeast extract |
| 6.8gr | Sodium thiosulphate | 5gr | L-lysine HCl |
| 0.8gr | Ferric ammonium citrate | 3.75gr | Xylose |
| 0.08gr | Phenol red | 7.5gr | Lactose |
| 12.5gr | Agar | 7.5gr | Sucrose |
| 0.2 +/- 7.4 | pH | 1gr | Sodium deoxycholate |
اصول و تفسیر محیط کشت XLD آگار
آگار زایلوز لیزین دئوکسی کولات (XLD) یک محیط انتخابی، افتراقی و شاخص است. سه منبع کربوهیدرات اضافه شده در غلظت های مختلف وجود دارند، زایلوز محدود است در حالی که لاکتوز و ساکارز در طول دوره انکوباسیون تجویز شده پایان ناپذیر در نظر گرفته می شوند.
◈ گزینش پذیری: عامل انتخابی سدیم دی اکسی کولات، نمک صفراوی است که از رشد ارگانیسم های گرم مثبت جلوگیری می کند.
◈ تمایز: توسط سه سیستم نشانگر انجام می شود.
زایلوز، لاکتوز و ساکارز، همراه با فنل قرمز، کربوهیدرات‌های قابل تخمیر هستند. تخمیر قندها PH محیط را به حالت اسیدی می رساند و رنگ محیط زرد می شود.
دکربوکسیلاسیون لیزین، در غیاب تخمیر لاکتوز و ساکارز، منجر به بازگشت به pH قلیایی می شود. این PH قلیایی رنگ قرمز محیط را باز می گرداند.
تیوسولفات سدیم و آمونیوم آهن به عنوان شاخص های تولید سولفید هیدروژن (H2S) در شرایط قلیایی عمل می کنند.
محیط کشت XLD آگار هم یک محیط انتخابی و هم تمایزی است. حاوی عصاره مخمر به عنوان منبعی از مواد مغذی و ویتامین است. از سدیم دی اکسی کولات به عنوان عامل انتخابی استفاده می کند و بنابراین، برای میکروارگانیسم های گرم مثبت مهار کننده است. زایلوز در محیط گنجانده می شود زیرا عملاً توسط تمام روده ها به جز شیگلا تخمیر می شود و این ویژگی باعث تمایز گونه های شیگلا می شود. لیزین برای ایجاد امکان تمایز گروه سالمونلا از غیر بیماری زاها گنجانده شده است زیرا بدون لیزین، سالمونلاها به سرعت زایلوز را تخمیر می کنند و از گونه های غیر بیماری زا قابل تشخیص نیستند. پس از اینکه سالمونلاها ذخایر زایلوز را تخلیه کردند، لیزین از طریق آنزیم لیزین دکربوکسیلاز مورد حمله قرار می گیرد و به pH قلیایی باز می گردد که شبیه واکنش شیگلا است.
نکات محیط کشت XLD آگار
⚡ ارگانیسم‌هایی که قادر به استفاده از کربوهیدرات‌ها نیستند، مانند شیگلا و ادواردسیلا، هیچ تغییر قابل توجهی ایجاد نمی‌کنند و بنابراین کلنی‌ها و محیط پس از جوجه‌کشی قرمز باقی می‌مانند.
⚡ ارگانیسم‌هایی که فقط قادر به تخمیر زایلوز هستند، مانند سالمونلا، ذخایر زایلوز را کاهش می‌دهند و شروع به استفاده از لیزین می‌کنند و در نتیجه pH را به قلیایی تغییر می‌دهند و رنگ را به قرمز باز می‌گردانند. با این حال، وجود گونه های سالمونلا و ادواردسیلا با نشانگر سولفید هیدروژن از شیگلا متمایز می شود.
⚡ سایر ارگانیسم‌های مهار نشده که قادر به تخمیر لاکتوز یا ساکارز هستند، به دلیل ادامه تولید اسید، کلنی‌های زرد تولید می‌کنند، سطح بالای اسید تولید شده از بازگشت pH به مقدار قلیایی جلوگیری می‌کند و در نتیجه تغییر pH ایجاد می‌شود. این موجودات شامل اشریشیا، کلبسیلا، سراتیا، سیتروباکتر کوزیری، یرسینیا انتروکولیتیکا هستند.
⚡ کلنی های زرد برای ارگانیسم های لیزین منفی مانند گونه های پروتئوس نیز مشاهده می شود.
⚡ گنجاندن یک سیستم نشانگر H2S متشکل از تیوسولفات سدیم و سیترات آمونیوم فریک ظرفیت تمایز فرآورده را بهبود می بخشد: این امکان تجسم تولید سولفید هیدروژن را فراهم می کند که باعث تشکیل کلنی هایی با مراکز سیاه می شود.
| نتایج | رشد | باکتری |
| Red colonies with black center . | Good . | Salmonella H2S positive, Edwardsiella |
| Red colonies . | Good . | Shigella spp. et Salmonella H2S negative, Providencia |
| Yellow colonies | Partial inhibition | E. coli |
| Yellow colonies / Yellow and mucoid colonies | Partial inhibition . | Enterobacter / Klebsiella . |
| . . . | Red to yellow colonies, some strains of Proteus will give colonies with a black center | Proteus . . |
| Red colonies “Shigella-like” | Partial inhibition | Pseudomonas |
| / | Inhibited | Enterococcus |
| / | Inhibited | Gram-positive bacteria |
محدودیت های استفاده از محیط کشت
⚡ انکوباسیون بیش از 48 ساعت ممکن است منجر به نتایج مثبت کاذب شود. رنگ پس از 24 ساعت ناپدید می شود، بنابراین مشاهدات باید بین 18 تا 24 ساعت انجام شود
⚡ انکوباسیون طولانی مدت بیش از زمان های توصیه شده تجویز نمی شود زیرا ممکن است مثبت کاذب به دلیل برگشت قلیایی کلونی های اسیدی معمولی رخ دهد.
⚡ برخی از گونه های شیگلا (1%) لاکتوز را تخمیر می کنند و کلنی های زرد غیر معمول تولید می کنند.
⚡ S. Paratyphi A، S. Choleraesuis، S. Pullorum و S. Gallinarum می توانند کلنی های قرمز بدون H2S تشکیل دهند، بنابراین شبیه شیگلا هستند.
موارد استفاده محیط کشت XLD آگار
- XLD Agar یک محیط متمایزی انتخابی برای جداسازی پاتوژن های روده ای گرم منفی از نمونه های مدفوع و سایر مواد بالینی است.
- به ویژه برای جداسازی گونه های شیگلا و سالمونلا مناسب است.
- آزمایش میکروبیولوژیکی غذاها، آب و محصولات لبنی.
مطالب مفید:
“کیمیا زیست گستر نوین” در راستای ارتقاء تولیدات و سطح علمی کشور مبادرت به واردات و توزیع مواد شیمیایی و مصرفی آزمایشگاهی کرده است. هدف مجموعه ما تأمين مواد و تجهيزات مورد نياز در بخش هاى مختلف آزمايشگاهى، تحقيقاتى، بيمارستانى، صنعتى و … مي باشد.
