محیط کشت اندو آگار

محیط کشت اندو آگار توسط Endo برای تمایز باکتری های گرم منفی بر اساس تخمیر لاکتوز و در عین حال مهار باکتری های گرم مثبت ساخته شد.
مهار بعدی بدون استفاده از نمک‌های صفراوی که به طور سنتی مورد استفاده قرار می‌گرفت به دست آمد.
اندو در مهار باکتری های گرم مثبت در محیط خود با ادغام سولفیت سدیم و فوشین بازی موفق بود.
اندو آگار به دست آمده که با نام های فوشین سولفیت و انفوزیون آگار نیز شناخته می شود، برای جداسازی باسیل های تیفوئید استفاده شد.
تغییرات زیادی در این محیط در طول سال ها انجام شده است.
Endo Agar امروزه یک محیط انتخابی است که برای تایید آزمایش احتمالی برای اعضای گروه کلی فرم از نمونه های بالینی و غیر بالینی توصیه می شود.

ترکیبات محیط کشت اندو آگار

ترکیبات	گرم/لیتر
پپتون	10
لاکتوز	10
دی پتاسیم فسفات	3.5
سدیم سولفیت	2.5
فوشین بازی	0.5
آگار	15

pH نهایی (در 25 درجه سانتیگراد): 0.2±7.5

اصول اندو آگار

محیط کشت اندو آگار حاوی پپتون است که نیتروژن، کربن، ویتامین ها و مواد معدنی مورد نیاز برای رشد باکتری ها را فراهم می کند.
سولفیت سدیم و فوشسین بازی این محیط را با سرکوب ارگانیسم های گرم مثبت انتخابی می کند.
کلنی های لاکتوز مثبت رنگ قرمز ناشی از واکنش آلدهید با سولفیت سدیم و فوشین بازی را نشان می دهند.
ایجاد درخشش فلزی زمانی اتفاق می افتد که ارگانیسم با تخمیر لاکتوز آلدئید تولید کند. باکتری های تخمیر ناپذیر لاکتوز کلونی های شفاف و بی رنگ را تشکیل می دهند.
بنابراین کلیفرم ها در تخمیر لاکتوز کلنی های صورتی تولید می کنند در حالی که لاکتوز غیر تخمیری کلنی های بی رنگ را در محیط تولید می کنند.
با اشریشیا کلی، این واکنش با متبلور شدن فوشین بسیار واضح است و درخشش فلزی مایل به سبز دائمی (درخشش فوشسین) را در کلنی ها نشان می دهد.
رشد بی رنگ، بژ یا صورتی نباشد، لاکتوز استفاده نمی شود و احتمالاً یک غیرکلیفرم گرم منفی است.
اگر رشد خوب صورتی/قرمز باشد، از لاکتوز استفاده می شود و احتمالاً باکتری یک کلیفرم گرم منفی است. همچنین اگر دارای درخشش فلزی روشن باشد، لاکتوز بسیار مورد استفاده قرار می گیرد و باکتری احتمالا یک کلیفرم گرم منفی است.

(اگر رشد ضعیفی داشته باشد یا رشد نداشته باشد، به یاد بیاورید که احتمالاً یک ارگانیسم گرم مثبت است.)

تهیه و روش استفاده از اندو آگار

41.5 گرم را در 1000 میلی لیتر آب مقطر معلق کنید.
حرارت دهید تا به جوش آید تا محیط کاملا حل شود.
با اتوکلاو کردن با فشار 15 پوند (121 درجه سانتیگراد) به مدت 15 دقیقه استریل کنید.
قبل از ریختن در صفحات پتری استریل خوب مخلوط کنید.

توجه: اگر محیط کشت جامد شده تا حدودی قرمز است، برای از بین بردن رنگ، چند قطره (حداکثر 1 میلی لیتر در لیتر) از محلول 10 درصد سولفیت سدیم تازه تهیه شده اضافه کنید و بجوشانید.

نمونه را در اسرع وقت پس از دریافت در آزمایشگاه رگه کنید.
صفحه رگه ای عمدتاً برای جداسازی کشت های خالص از نمونه های حاوی فلور (flora) مخلوط استفاده می شود.
از طرف دیگر، اگر ماده مستقیماً از یک سواب کشت می‌شود، سواب را روی یک ناحیه کوچک از سطح در لبه بغلتانید. سپس از این ناحیه تلقیح شده رگه بزنید.
یک محیط غیرانتخابی مانند کلمبیا آگار با 5 درصد خون گوسفند نیز باید تلقیح شود تا سایر موجودات موجود در نمونه را نشان دهد.
بشقاب ها را به مدت 18 تا 24 ساعت در دمای 2±35 درجه سانتیگراد، محافظت شده از نور، نگهداری کنید.

تفسیر نتایج اندو آگار

ظاهر کلنی	میکروارگانیسم
قرمز	لاکتوز مثبت
قرمز با درخشش فلزی دائمی	Escherichia coli
قرمز مایل به قرمز، نیمکره ای، مخاطی	رشد خوب و انبوه؛ صورتی تا قرمز رزی با براق فلزی
بی رنگ، شفاف	لاکتوز منفی

ارگانیسم	گرم مثبت / گرم منفی	رشد
Klebsiella aerogenes	گرم منفی	رشد خوب و انبوه؛ کلنی های صورتی
Enterococcus faecalis	گرم مثبت	رشد ضعیف؛ کلونی های کوچک صورتی
Escherichia coli	گرم منفی	رشد خوب و انبوه؛ صورتی تا قرمز رزی با براق فلزی
Klebsiella pneumonia	گرم منفی	خوب- انبوه؛ کلونی های موکوئید صورتی
Proteus vulgaris	گرم منفی	رشد خوب و انبوه؛ کلونی های بی رنگ تا صورتی کم رنگ
Pseudomonas aeruginosa	گرم منفی	رشد خوب وانبوه؛ کلونی های بی رنگ و نامنظم
Salmonella Typhi	گرم منفی	رشد خوب و انبوه؛ بی رنگ تا صورتی کمرنگ
Enterobacter cloacae	گرم منفی	رشد خوب‌؛ کلنی های صورتی رنگ
Salmonella Typhimurium	گرم منفی	رشد خوب و انبوه؛کلنی های بی رنگ
Salmonella Enteritidis	گرم منفی	رشد خوب و انبوه؛کلنی های بی رنگ
Shigella flexneri	گرم منفی	رشد خوب و انبوه؛کلنی های بی رنگ
Enterobacter aerogenes	گرم منفی	رشد خوب تا عالی؛ سبز، براق فلزی

موارد استفاده از اندو آگار

محیط کشت اندو آگار در حال حاضر برای تمایز ارگانیسم‌های روده‌ای تخمیرکننده لاکتوز و تخمیر لاکتوز غیر لاکتوز، به‌ویژه در طی تأیید آزمایش احتمالی برای کلیفرم‌ها استفاده می‌شود.
Endo Agar توسط APHA به عنوان یک محیط مهم در بررسی میکروبیولوژیکی آب و فاضلاب، محصولات لبنی و غذاها توصیه می شود.
اندو آگار برای تایید تشخیص و شمارش باکتری های کلیفرم پس از آزمایش احتمالی آب آشامیدنی استفاده می شود.
همچنین برای تشخیص و جداسازی کلیفرم ها و کلیفرم های مدفوعی از شیر، محصولات لبنی و غذا استفاده می شود.
محیط کشت آندو آگار برای شمارش کلیفرم ها در آب با روش فیلتراسیون غشایی در محیط آزمایشگاهی استفاده می شود.

محدودیت‌های محیط کشت اندو آگار

علاوه بر انتروباکتریاسه، سایر باکتری های گرم منفی و مخمرها نیز ممکن است رشد کنند.
از قرار گرفتن محیط در معرض نور اجتناب کنید، زیرا ممکن است منجر به اکسیداسیون نور و کاهش بهره وری محیط شود.
از گرم شدن بیش از حد محیط باید اجتناب شود، زیرا ممکن است بهره وری محیط را از بین ببرد.
برای تایید بیشتر باید آزمایشات بیوشیمیایی بیشتری انجام شود.
اگر تلقیح بیش از حد سنگین باشد، درخشندگی ممکن است سرکوب شود.
گاهی اوقات، موجودات غیرکلیفرم ممکن است کلنی های براق معمولی تولید کنند. ارگانیسم‌های کلیفرم ممکن است گاهی اوقات کلنی‌های غیر معمول از جمله کلنی‌های قرمز تیره یا هسته‌دار بدون براق تولید کنند.

مطالب مفید:

درحال حاضر مجموعه کیمیا زیست گستر نوین قادر به ارائه انواع مواد اولیه با گریدهای غذایی، دارویی، آرایشی، بهداشتی و صنعتی در حجم های بالا و کیفیت عالی از تولید کننده های معتبر می باشد. درصورت نیاز می توانید درخواست خود را با ما درمیان گذاشته تا در سریعترین زمان ممکن اطلاعات لازم را در اختیارتان قرار دهیم.