محیط کشت سیمون سیترات آگار

Ⅰ. بررسی اجمالی محیط کشت سیمون سیترات آگار
Ⅱ. ترکیب و تهیه سیمون سیترات آگار
Ⅲ. اصول سیمون سیترات آگار
Ⅳ. تفسیر

Ⅰ. بررسی اجمالی Simmons Citrate Agar

محیط کشت سیمون سیترات آگار (Simmons Citrate Agar) یک محیط انتخابی و افتراقی بر اساس استفاده از سیترات است. این محیط توانایی موجودات زنده را در استفاده از سیترات به عنوان تنها منبع کربن آزمایش می کند.

در اوایل دهه 1920، کوزر یک فرمول محیطی مایع برای تمایز کلیفرم های مدفوعی از گروه کلیفرم ایجاد کرد. سیمونز بعداً این فرمول را اصلاح کرد تا یک محیط جامد تولید کند که خطاهای احتمالی را هنگام تفسیر رشد حذف کند. سیمون (سیمونز) سیترات آگار شکل جامد شده از محیط سیترات کوزر (Koser’s citrate medium) است که از این مضرات رنج می برد که ظاهر کاذب رشد هنگام استفاده از تلقیح های بزرگ رخ می دهد. سیمون فرمول کوسر را با افزودن آگار و بروموتیمول بلو اصلاح کرد.

این محیط بخشی از تست های IMViC است. یک واکنش مثبت با رشد با رنگ آبی شدید به صورت مایل نشان داده می شود: کلبسیلا، انتروباکتر، سیتروباکتر، پروویدنسیا، پروتئوس، سراتیا، ویبریو کلرا، سودوموناس، سالمونلا انتریتیدیس و اعضای زیرجنسی سالمونلا II، III و IV.

Ⅱ. ترکیب و تهیه محیط کشت

اجزای تشکیل دهنده، پودر را در آب معلق کنید (23.3 گرم در 1000 میلی لیتر آب تصفیه شده / مقطر). محیط را برای چند ثانیه می جوشانند تا مواد کاملاً حل شوند. درون لوله ها یا بطری ها پخش کنید و با اتوکلاو در دمای 121 درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل کنید. اجازه دهید لوله ها در یک شیب خنک شوند.

Composition of Simmons Citrate Agar
gram / litre	Ingredients	gram / litre	Ingredients
5gr	Sodium chloride	1gr	Sodium citrate
1gr	Mono-ammonium phosphate	0.2gr	Magnesium sulfate
0.08gr	Bromothymol blue	1gr	Dipotassium phosphate
0.2 +/- 6.8	pH final	15gr	Agar

آمونیوم دی هیدروژن فسفات تنها منبع نیتروژن در سیمونز سیترات آگار است. دی پتاسیم فسفات به عنوان یک بافر عمل می کند. کلرید سدیم تعادل اسمزی محیط را حفظ می کند. سیترات سدیم تنها منبع کربن در این محیط است. سولفات منیزیم یک کوفاکتور برای انواع واکنش های متابولیک است. برومو تیمول بلو نشانگر pH است.

باکتری هایی که می توانند روی محیط کشت سیمون سیترات آگار رشد کنند، آنزیمی به نام سیترات پرماز تولید می کنند که قادر به تبدیل سیترات به پیرووات است. سپس پیرووات می تواند برای تولید انرژی وارد چرخه متابولیک ارگانیسم شود. رشد نشان دهنده استفاده از سیترات، یک متابولیت میانی در چرخه کربس است. وقتی باکتری‌ها سیترات را متابولیزه می‌کنند، نمک‌های آمونیوم به آمونیاک تجزیه می‌شوند که قلیاییت را افزایش می‌دهد. تغییر pH نشانگر آبی برومتیمول در محیط را از سبز به آبی بالاتر از pH 7.6 تبدیل می کند.

Ⅲ. اصول محیط کشت سیمون سیترات آگار

باکتری هایی که می توانند از سیترات به عنوان تنها منبع کربن و نمک آمونیوم معدنی به عنوان تنها منبع نیتروژن استفاده کنند در این محیط رشد می کنند. در موجوداتی که قادر به استفاده از سیترات به عنوان منبع کربن هستند، آنزیم سیتراز سیترات را به اسید اگزالواستیک و اسید استیک هیدرولیز می کند. سپس اسید اگزالواستیک به اسید پیروویک و CO2 هیدرولیز می شود. اگر CO2 تولید شود، با اجزای محیط واکنش می دهد و یک ترکیب قلیایی تولید می کند (مثلا Na2CO3). pH قلیایی نشانگر pH (برومتیمول آبی) را از سبز به آبی تغییر می دهد.

Ⅳ. تفسیر محیط کشت سیمون سیترات آگار

Bacteria citrate Negative
A negative reaction is evidenced by the absence of growth to a trace of growth with no color change (the medium remains dark green): Escherichia coli, Shigella, Yersinia, Edwardsiella

Bacteria citrate positive
Klebsiella, Enterobacter , Citrobacter, Providencia, Proteus, Serratia, vibrio cholerae, Pseudomonas, Salmonella enteritidis and members of the subgenera Salmonella II, III and IV.

Ⅴ. سوالات متداول

س: آزمایش آگار سیترات سیمونز برای چیست؟
پاسخ: محیط کشت سیمون سیترات آگار برای تمایز بین باکتری ها بر اساس توانایی استفاده از سیترات به عنوان منبع انرژی استفاده می شود.

س: آزمایش سیترات از چه نوع شاخصی استفاده می کند؟
پاسخ: نشانگر pH بروموتیمول آبی

س: آیا اکلای از سیترات استفاده می کند؟
پاسخ: E coli نمی تواند از سیترات به عنوان منبع کربن در هوازی استفاده کند، زیرا فاقد انتقال دهنده سیترات است، اما می تواند از سیترات در شرایط بی هوازی از طریق بیان آنتی پورت سیترات/سوکسینات CitT استفاده کند.

س: چه باکتری هایی سیترات مثبت هستند؟
پاسخ: کلبسیلا، انتروباکتر، سیتروباکتر، پروویدنسیا، پروتئوس، سراتیا، ویبریوکلرا، سودوموناس، سالمونلا انتریتیدیس و اعضای زیرجنس سالمونلا II، III و IV.

محدودیت های Simmons Citrate Agar

مهم است که هیچ ماده مغذی را به محیط کشت سیمون سیترات آگار منتقل نکنید زیرا این امر منجر به آزمایشات مثبت کاذب می شود.
برخی از موجودات قادر به رشد در سیترات هستند و تغییر رنگ ایجاد نمی کنند. حتی در صورت عدم تغییر رنگ، رشد یک آزمایش استفاده از سیترات مثبت در نظر گرفته می شود.
تست هایی که نتایج مبهم دارند باید تکرار شوند.
واکنش های محیط کشت سیمون سیترات آگار به تنهایی برای شناسایی در سطح گونه کافی نیست.
تلقیح باید از یک کشت خالص و یک شبه (24ساعت) رشد کرده روی یک محیط جامد باشد و نه از سوسپانسیون محیط مایع.

کنترل کیفیت روی سیمون سیترات آگار

کنترل مثبت: کلبسیلا پنومونیه ATCC® 13883. رشد; تغییر رنگ متوسط به آبی
کنترل منفی: ا.کلای ATCC® 25922. رشد مهار شده یا بدون رشد. بدون تغییر رنگ محیط

مطالب مفید:

“کیمیا زیست گستر نوین” در راستای ارتقاء تولیدات و سطح علمی کشور مبادرت به واردات و توزیع مواد شیمیایی و مصرفی آزمایشگاهی کرده است. هدف مجموعه ما تأمين مواد و تجهيزات مورد نياز در بخش هاى مختلف آزمايشگاهى، تحقيقاتى، بيمارستانى، صنعتى و … مي باشد.