محیط کشت هکتون انتریک آگار
Ⅰ. بررسی اجمالی محیط کشت هکتون انتریک آگار
Hektoen Enteric Agar یک محیط انتخابی و افتراقی است که برای جداسازی و تمایز اعضای گونه های سالمونلا و شیگلا از سایر انتروباکتریاسه ها طراحی شده است.
این رسانه در سال 1968 توسط Sylvia King و William I. Metzger معرفی شد. آنها در حین کار در موسسه Hektoen در شیکاگو، محیط HE Agar را فرموله کردند تا سالمونلا و شیگلا را از نمونه های بالینی افزایش دهند.
Ⅱ. آماده سازی / ترکیب
- 72.66 گرم را در 1000 میلی لیتر آب تصفیه شده / مقطر معلق کنید.
- حرارت دهید تا به جوش آید تا محیط کاملا حل شود.
- تا دمای 45-50 درجه سانتیگراد خنک شود.
- خوب مخلوط کنید و در صفحات پتری استریل بریزید.
- محیط را با مدفوع تازه معلق در محلول رینگر تلقیح کنید یا مستقیماً با سواب رکتوم تلقیح کنید.
- تلقیح را پخش کنید تا کلنی هایی به خوبی از هم جدا شوند.
- به مدت 18-24 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
- انکوباسیون بیشتر تمایز بین سالمونلا و شیگلا را بهبود می بخشد.
توجه: اتوکلاو نکنید.
| ترکیبات | گرم / لیتر | ترکیبات | گرم / لیتر |
|---|---|---|---|
| پروتئاز پپتون | 12 گرم | عصاره مخمر | 3 گرم |
| سدیم کلراید | 5 گرم | نمک های صفراوی | 9 گرم |
| سیترات آهن آمونیاکی | 1.5 گرم | سالیسین | 2 گرم |
| لاکتوز | 12 گرم | ساکارز | 12 گرم |
| اسید فوشین | 0.1 گرم | بروموتیمول آبی | 0.065 گرم |
| آگار | 14 گرم | اسیدیته | 0.2 -/+ 7.5 |
◈ هوبن و همکارانش 15 میلی گرم در لیتر نووبیوسین برای بهبود گزینش پذیری محیط با مهار گونه های سیتروباکتر و پروتئوس اضافه کردند.
Ⅲ. اصول محیط کشت هکتون آنتریک آگار
Hektoen Enteric agar یک محیط انتخابی و افتراقی برای جداسازی و تمایز پاتوژن ها از نمونه های بالینی است.
◈ انتخاب پذیری: وجود نمک ها و رنگ های صفراوی بیشتر ارگانیسم های گرم مثبت را مهار می کند، که فقط به باسیل های گرم منفی اجازه می دهد تا روی آگار رشد کنند.
غلظت بالای نمک های صفراوی به طور جزئی یا کامل بیشتر فلور کلیفرم غیر بیماری زا دستگاه روده را مهار می کند. از آنجا که سالمونلا و شیگلا می توانند این مواد بازدارنده را تحمل کنند، معمولاً سریعتر و بزرگتر از کلیفرم ها رشد می کنند.
◈ تمایز: تخمیر کربوهیدرات هایی مانند لاکتوز، ساکارز و سالیسین یکی از ویژگی های تمایز مورد استفاده برای شناسایی کلیفرم ها است. بروموتیمول آبی در حضور اسید زرد و فوشین در حضور آلدئید قرمز می شود.
سالمونلا و شیگلا نمی توانند از این سه کربوهیدرات خاص (کلنی های شفاف، سبز روشن یا آبی مایل به سبز) استفاده کنند، در حالی که اکثر کلیفرم های غیر بیماری زا حداقل می توانند از یکی از آنها (کلنی های نارنجی، زرد یا سالمون رنگ) استفاده کنند.
تمایز اضافی بر اساس تولید سولفید هیدروژن به دلیل وجود تیوسولفات سدیم و سیترات آهن امکان پذیر است. منجر به ایجاد کلنی های سیاه یا مرکز سیاه رنگ می شود که به دلیل تشکیل سولفید آهن ایجاد می شود.
توجه داشته باشید :
– نمک های صفراوی می توانند از محیط خارج شده و به صورت یک ناحیه ابری در اطراف کلنی ها ظاهر شوند.
– محتوای پپتون بالا اثر مهاری نمک های صفراوی را بر روی گونه های شیگلا به ویژه جبران می کند.
Ⅳ. تفسیر HE آگار
◈ پس از 24 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد هوازی، به طور کلی:
تخمیر حداقل یکی از قندها منجر به رنگ آمیزی “سالمون / زرد / نارنجی” کلنی ها می شود.
عدم تخمیر منجر به رنگ آبی یا سبز کلنی ها می شود.
تولید سولفید هیدروژن (H2S) با کلنی های مرکز سیاه یا سیاه مشخص می شود.
| Growth | species |
|---|---|
| Large size, yellow to salmon color, possible inhibition of some strains | E. coli . |
| Large size, yellow to salmon | Enterobacter/Klebsiella |
| Variable size, from blue-green to blue or salmon, most strains being black in the center or on their entire surface | Proteus . . |
| Blue-green to blue in color, most strains being black in the center or over their entire surface. All Salmonella serotypes have this aspect on HE agar with the exception of the Typhi serotype, which is a low producer of H2S, and rare lactose-fermenting strains of Salmonella. | Salmonella . . . . . |
| Green color, moist and convex | Shigella |
| Irregular, green to brown in color | Pseudomonas |
| No / low growth | Gram-positive bacteria |
محدودیت های استفاده از محیط کشت هکتون انتریک آگار
- تنها یک محیط به ندرت قادر به بازیابی همه پاتوژن های موجود در یک نمونه است. بنابراین، محیط های اضافی برای جداسازی سالمونلا و یا شیگلا و احتمالاً سایر پاتوژن های روده ای باید با نمونه تلقیح شود.
- کلنی های Proteus mirabilis ممکن است شبیه سالمونلا در این محیط باشند.
- برخی از سویه های شیگلا ممکن است به انکوباسیون 42 تا 48 ساعته نیاز داشته باشند.
- اگرچه آزمایش‌های تشخیصی خاصی ممکن است مستقیماً بر روی این محیط انجام شود، آزمایش‌های بیوشیمیایی و در صورت لزوم، آزمایش‌های ایمونولوژیک با استفاده از کشت‌های خالص برای شناسایی کامل ضروری است.
- کلنی های مشکوک به سالمونلا یا شیگلا باید از نظر بیوشیمیایی و سرولوژیکی تایید و شناسایی شوند.
مزایای استفاده از HE آگار
- محیط کشت هکتون انتریک آگار برای جداسازی افتراقی و انتخابی گونه های سالمونلا و شیگلا از نمونه های پاتولوژیک روده ای مطابق با فارماکوپه ایالات متحده توصیه می شود.
- این محیط توسط فارماکوپه ایالات متحده، 2009 برای آزمایش وجود سالمونلا در مکمل های غذایی توصیه شده است.
- این محیط در آزمایش سالمونلا در نمونه غذا با استانداردهای مختلف توصیه می شود.
- HE آگار در حال حاضر به عنوان یک محیط کشت مستقیم و غیرمستقیم برای نمونه های مدفوع برای افزایش بازیابی گونه های سالمونلا و شیگلا از تعداد زیادی فلور طبیعی مخلوط مدفوعی استفاده می شود.
- از آن به عنوان یک محیط کشت برای بازیابی پاتوژن های گوارشی مانند سالمونلا و شیگلا از غذا، آب و نمونه های مدفوع مشکوک به وجود این ارگانیسم ها استفاده می شود.
مطالب مفید:
“کیمیا زیست گستر نوین” در راستای ارتقاء تولیدات و سطح علمی کشور مبادرت به واردات و توزیع مواد شیمیایی و مصرفی آزمایشگاهی کرده است. هدف مجموعه ما تأمين مواد و تجهيزات مورد نياز در بخش هاى مختلف آزمايشگاهى، تحقيقاتى، بيمارستانى، صنعتى و … مي باشد.
