DNAse test آگار
DNAse test آگار برای تعیین توانایی ارگانیسم در هیدرولیز DNA و استفاده از آن به عنوان منبع کربن و انرژی برای رشد استفاده می شود. عمدتاً برای افتراق استافیلوکوکوس اورئوس از سایر استافیلوکوک ها استفاده می شود. DNase ها آنزیم هایی هستند که DNA را هیدرولیز کرده و نوکلئوتیدها و فسفات آزاد، آزاد می کنند. DNaseهای تولید شده توسط باکتری، اندونوکلئازهای خارج سلولی هستند که DNA را می شکافند و غلظت بالایی از الیگونوکلئوتیدها را تولید می کنند. برای تشخیص این آنزیم‌ها از محیط های مختلفی استفاده می‌شود، برخی از هیچ نشانگر استفاده نمی‌کنند (نیاز به افزودن معرف HCl است) و برخی دیگر از شاخص‌های مختلفی (تولوئیدن بلو O یا متیل سبز) استفاده می‌کنند.
آماده سازی محیط کشت
DNAse آگار بدون نشانگر
فرمول اولیه توسط جفریس طراحی شد که DNA را در آگار تریپتیکاز سویا ادغام کرد. این محیط به افزودن اسید (HCL) برای شناسایی DNA پلیمریزه شده نیاز داشت.
| gram / litr | ingredient | gram / litr | ingredient |
| 5,0g | Papaic Digest of Soybean Meal | 15,0g | Pancreatic Digest of Casein |
| 2,0g | Deoxyribonucleic Acid | 5,0g | Sodium Chloride |
| 0.2 +/- 7.3 | pH | 15,0g | Agar |
◈ اصل: هیدرولیز DNA با پاکسازی آگار پس از افزودن HCl مشاهده شد (الیگونوکلئوتیدها در اسید حل می شوند، اما نمک های DNA نامحلول هستند).
DNase آگار با متیل گرین
توصیف شده توسط P.B. SMITH، ادغام رنگ متیل گرین در محیط آگار حاوی اسید دئوکسی ریبونوکلئیک، محیط بهبود یافته ای را برای تشخیص باکتری های مولد دئوکسی ریبونوکلئاز می دهد. استفاده از رنگ، استفاده از اسید را برای نشان دادن فعالیت دئوکسی ریبونوکلئاز غیرضروری می کند، بنابراین امکان پاساز سلولی یا انکوباسیون مجدد کلنی ها را فراهم می کند.
متیل گرین …………………. 0,05 گرم
◈ اصل: رنگ سبز متیل می تواند به DNA پلیمریزه شده متصل شود تا یک کمپلکس سبز پایدار در pH 7.3 تشکیل دهد. عمل DNase ساختار DNA را پلیمریزه می‌کند و متیل گرین آزاد می‌کند، متیل سبز آزاد به‌طور خود به خود در pH 7.3 رنگ‌زدایی می‌کند و در نتیجه هاله‌های بی‌رنگ در اطراف کلنی‌های DNase مثبت ایجاد می‌شود.
DNase آگار با تولویدین بلو O
توصیف شده توسط Schreier، در اصل برای تمایز آسان و سریع S. marcescens از سایر اعضای بخش KES طراحی شده است: Klebsiella، Enterobacter، Serratia.
تولویدین آبی O .. گرم 0.1
◈ اصل: هنگامی که تولویدین آبی O (TBO) اضافه می شود، یک کمپلکس با DNA تشکیل می شود که با هیدرولیز DNA ساختار آن تغییر می کند و در نتیجه رنگ صورتی روشن ایجاد می شود.
روش DNAse test/ نتایج
- یک خط در مرکز پلیت ایجاد می کنید (اگر از 2 گونه استافیلوکوک استفاده می کنید، می توانید جعبه را از وسط تقسیم کنید و هر موجود زنده را از یک طرف به پایین کشت دهید).
- در دمای 30 درجه سانتیگراد یا 37 درجه سانتیگراد انکوباسیون کنید.
- پس از انکوباسیون: اگر محیط DNase حاوی نشانگر رنگی نباشد: ظرف را با اسید کلریدریک 1N پر کنید و بگذارید ظرف چند دقیقه بماند تا معرف جذب شود. اسید کلریدریک اضافی را تخلیه کنید، سپس جعبه را در عرض 5 دقیقه در پس زمینه تیره بررسی کنید.
- Serratia marcescens (Serratia fonticola is the only Serratia sp. that is DNase negative)
- Staphylococcus aureus
- Campylobacter jejuni
- Moraxella catarrhalis
- Corynebacterium diphtheriae
دلایل استفاده از DNAse test Agar
- برای کشف توانایی ارگانیسم برای هیدرولیز اسید دئوکسی ریبونوکلئیک انجام می شود.
- به تمایز استافیلوکوکوس اورئوس کمک می کند، که توانایی تولید آنزیم دئوکسی ریبونوکلئاز را از سایر استافیلوکوک هایی که توانایی تولید DNase را ندارند، دارد.
- می توان از آن در انجام آزمایش کواگولاز استفاده کرد، به خصوص زمانی که پلاسما در دسترس نباشد. همچنین این تست قابل اعتمادتر از تست کواگولاز است زیرا مواقعی وجود دارد که تفسیر نتیجه آزمایش کواگولاز دشوار است.
- توانایی تشخیص M. catarrhalis از دیپلوکوکسی گرم منفی با منشاء انسانی مانند N. gonorrhea و N. meningitidis را دارد.
“کیمیا زیست گستر نوین” در راستای ارتقاء تولیدات و سطح علمی کشور مبادرت به واردات و توزیع مواد شیمیایی و مصرفی آزمایشگاهی کرده است. هدف مجموعه ما تأمين مواد و تجهيزات مورد نياز در بخش هاى مختلف آزمايشگاهى، تحقيقاتى، بيمارستانى، صنعتى و … مي باشد.
