محیط کشت مولر هینتون آگار
Ⅰ. بررسی اجمالی محیط کشت مولر هینتون آگار
Ⅱ. آماده سازی / ترکیب
Ⅲ. روش
Ⅰ. بررسی اجمالی محیط کشت مولر هینتون آگار
مولر هینتون آگار یک محیط رشد میکروبیولوژیکی است که معمولاً برای آزمایش حساسیت آنتی‌بیوتیکی، به‌ویژه آزمایش‌های انتشار دیسک استفاده می‌شود. همچنین برای جداسازی و نگهداری گونه های نایسریا و موراکسلا استفاده می شود. در ابتدا توسط مولر و هینتون به عنوان یک محیط بدون پروتئین برای جداسازی اولیه گونه های نایسریا فرموله شد. Mueller Hinton آگار یک محیط جامد استاندارد شده است که برای مطالعه حساسیت باکتری ها به عوامل ضد میکروبی به روش انتشار (روش کربی بائر) یا رقیق سازی در آگار توصیه می شود.
این محیط خواص کمی دارد که آن را برای استفاده از آنتی بیوتیک عالی می کند. اول از همه، این یک محیط کشت غیرانتخابی و غیرمتمایز است. این بدان معنی است که تقریباً همه موجودات روی آن رشد خواهند کرد. علاوه بر این، حاوی نشاسته است. شناخته شده است که نشاسته سموم آزاد شده از باکتری ها را جذب می کند، به طوری که نمی توانند با آنتی بیوتیک ها تداخل داشته باشند. دوم، این یک آگار شل است. این امکان انتشار بهتر آنتی بیوتیک ها را نسبت به سایر صفحات فراهم می کند. انتشار بهتر منجر به یک منطقه مهار واقعی تر می شود.
Ⅱ. آماده‌سازی / ترکیب
- اجزای تشکیل دهنده، را در آب معلق کنید (38 گرم در 1000 میلی لیتر آب تصفیه شده / مقطر).
- محیط را برای چند ثانیه می جوشانند تا مواد کاملا حل شوند.
- با اتوکلاو کردن با فشار 15 پوند (121 درجه سانتیگراد) به مدت 15 دقیقه استریل کنید.
- تا دمای 47 درجه سانتیگراد خنک کنید، قبل از ریختن در ظروف پتری استریل خوب مخلوط کنید.
| ترکیبات | گرم / لیتر |
|---|---|
| پپتون | 17.5گرم |
| عصاره گوشت | 2گرم |
| نشاسته | 1.5گرم |
| آگار | 17گرم |
| اسیدیته نهایی | 0.1+/-7.3 |
◈ انواع مکمل ها را می توان به مولر هینتون آگار اضافه کرد، از جمله 5٪ خون گوسفند یا اسب بدون فیبرینه، 1٪ مکمل رشد و 2٪ کلرید سدیم.
◈ نشاسته برای جذب تمام متابولیت های سمی تولید‌شده اضافه می شود.
محیط کشت مولر هینتون حاوی عصاره گوشت گاو، هیدرولیز اسید کازئین، نشاسته و آگار است. عصاره گوشت گاو و هیدرولیز اسیدی کازئین نیتروژن، ویتامین ها، کربن، اسیدهای آمینه، گوگرد و سایر مواد مغذی ضروری را تامین می کند. نشاسته برای جذب هر متابولیت سمی تولید شده اضافه می شود. هیدرولیز نشاسته باعث تولید دکستروز می شود که به عنوان منبع انرژی عمل می کند. آگار عامل انجماد است.
Ⅲ. روش Mueller Hinton Agar
◈ سوسپانسیون استاندارد شده ارگانیسم در کل سطح محیط پخش می شود.
◈ دیسک های کاغذی آغشته به مقادیر خاصی از آنتی بیوتیک ها یا سایر عوامل ضد میکروبی روی سطح پشتی قرار می گیرند.
موارد استفاده از محیط کشت مولر هینتون آگار
- عمده ترین کاربرد مولر هینتون آگار برای آزمایش حساسیت ضد میکروبی است. این به محیط استاندارد برای روش Bauer Kirby تبدیل شده‌است و عملکرد آن توسط NCCLS مشخص شده‌است.
- می توان از آن برای کشت نایسریا استفاده کرد
- در کتابچه راهنمای تحلیلی باکتریولوژی FDA برای آزمایش مواد غذایی، و روش هایی که معمولاً روی باکتری های هوازی و بی هوازی اختیاری انجام می شود، مشخص شده‌است.
محدودیت های MHA
- عوامل متعددی می توانند بر نتایج تأثیر بگذارند: اندازه تلقیح، سرعت رشد، فرمولاسیون محیط و pH. برای اطمینان از نتایج قابل اعتماد، رعایت دقیق پروتکل مورد نیاز است.
- غیرفعال شدن دارو ممکن است ناشی از زمان های طولانی مدت انکوباسیون مورد نیاز رشد دهندگان کند باشد.
- تغییر در غلظت کاتیون های دو ظرفیتی، عمدتاً کلسیم و منیزیم، بر نتایج آزمایش آمینوگلیکوزید، تتراسایکلین و کولیستین با جدایه های P. aeruginosa تأثیر می گذارد.
مطالب مفید:
“کیمیا زیست گستر نوین” در راستای ارتقاء تولیدات و سطح علمی کشور مبادرت به واردات و توزیع مواد شیمیایی و مصرفی آزمایشگاهی کرده است. هدف مجموعه ما تأمين مواد و تجهيزات مورد نياز در بخش هاى مختلف آزمايشگاهى، تحقيقاتى، بيمارستانى، صنعتى و … مي باشد.
