محیط کشت مانیتول سالت آگار

Ⅰ. بررسی اجمالی محیط کشت مانیتول سالت آگار

Ⅱ. اصل مانیتول نمک آگار

Ⅲ. آماده سازی / ترکیب

Ⅳ. تفسیر

Ⅰ. بررسی اجمالی

Chapman Agar یا Mannitol Salt Agar یک محیط انتخابی است که برای جداسازی، شمارش و تمایز استافیلوکوک از نمونه های بالینی، غذایی، ضد عفونی کننده و آرایشی استفاده می شود. این محیط هم آگار انتخابی و هم آگار تمایزی است. این محیط ارگانیسم هایی را انتخاب می کند که می توانند در مناطقی با غلظت بالایی از نمک (کلرید سدیم) زندگی کنند و تخمیر مانیتول، که با چرخش زرد نشانگر pH (فنل قرمز) نشان داده شده است، تشخیص را ممکن می سازد. اگر یک موجود زنده بتواند مانیتول را تخمیر کند، یک محصول جانبی اسیدی تشکیل می‌شود که باعث زرد شدن فنل قرمز موجود در آگار می‌شود.

مانیتول سالت آگار (MSA) به عنوان یک محیط انتخابی و افتراقی برای جداسازی و شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس از نمونه های بالینی و غیر بالینی استفاده می شود. رشد گروهی از باکتری‌های خاص را تشویق می‌کند در حالی که از رشد سایرین جلوگیری می‌کند. این یک محیط انتخابی است که طبق توصیه‌های چاپمن برای جداسازی استافیلوکوک‌های بیماری‌زای احتمالی تهیه شده است.

Ⅱ. اصول مانیتول نمک آگار

◈ گزینش پذیری این محیط بر اساس وجود کلرید سدیم (7/5 درصد) است که اکثر باکتری های گرم منفی و گرم مثبت را مهار می کند.

◈ تمایز بر اساس توانایی یا عدم تخمیر مانیتول (تنها قند موجود در محیط) است. اگر تخمیر وجود داشته باشد، باعث اسیدی شدن می شود که در سطوح pH کمتر از 6.9 منجر به رنگ زرد محیط در حضور فنل قرمز (شاخص pH) می شود.

توجه داشته باشید:

• در نمونه های بالینی، مانیتول مثبت های جدا شده نشان دهنده استافیلوکوکوس اورئوس هستند و باید بیشتر مورد آزمایش قرار گیرند.
• باکتری غیر تخمیری که در برابر غلظت بالای نمک مقاومت می کند، به دلیل تخریب پپتون، ناحیه ای قرمز تا صورتی ایجاد می کند.

Ⅲ. آماده سازی / ترکیب

برای یک لیتر محیط 111 گرم از پودر را در 1 لیتر آب مقطر یا دیونیزه حل کنید. خوب مخلوط کنید. حرارت دهید تا به مدت 1 دقیقه بجوشد و مرتب تکان دهید تا کاملا حل شود. در اتوکلاو با دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل کنید. سپس تا دمای 45-50 درجه سانتیگراد خنک کنید، قبل از ریختن در ظروف پتری استریل خوب مخلوط کنید.

مانیتول سالت آگار حاوی پپتون ها و عصاره گوشت گاو است که نیتروژن، ویتامین ها، مواد معدنی و اسیدهای آمینه ضروری برای رشد را تامین می کند. غلظت 7.5% کلرید سدیم باعث مهار جزئی یا کامل ارگانیسم های باکتریایی غیر از استافیلوکوک می شود. کلرید سدیم همچنین الکترولیت های ضروری برای حمل و نقل و تعادل اسمزی را تامین می کند. مانیتول، کربوهیدرات قابل تخمیر است که تخمیر آن منجر به تولید اسید می شود و با نشانگر قرمز فنل شناسایی می شود و به تمایز گونه های استافیلوکوک کمک می کند. استافیلوکوک های کواگولاز مثبت (به عنوان مثال استافیلوکوکوس اورئوس) کلنی های زرد و محیط زرد اطراف را تولید می کنند در حالی که استافیلوکوک های کواگولاز منفی کلنی های قرمز تولید می کنند و هیچ تغییر رنگی در نشانگر قرمز فنل ایجاد نمی کنند. آگار عامل انجماد است.

Ⅳ. تفسیر محیط کشت مانیتول سالت آگار

استافیلوکوک های اورئوس به دلیل تخمیر مانیتول، کلنی های رنگدانه ای سرسبز را تشکیل می دهند که توسط هاله ای زرد رنگ احاطه شده اند. استافیلوکوک های غیر بیماری زا معمولاً کلنی های قرمز کوچکی تشکیل می دهند که رنگ محیط را تغییر نمی دهند. تغییر رنگ محیط، تخمیر مانیتول را نشان می دهد، نه رنگ کلنی. این امر به ویژه مهم است زیرا بسیاری از میکروکوکس ها دارای رنگدانه هستند.

کاربرد محیط کشت مانیتول سالت آگار

1. برای جداسازی انتخابی و تمایز استافیلوکوکوس اورئوس از نمونه های بالینی استفاده می شود.
2. همچنین برای شمارش استافیلوکوک ها در مواد غذایی و لبنیات استفاده می شود.
3. این محیط همچنین در راهنمای تجزیه و تحلیل باکتریولوژیک برای آزمایش لوازم آرایشی گنجانده شده است.
4. همچنین در بررسی باکتریولوژیکی آب استخر، آبگرم و آب آشامیدنی با استفاده از فیلتراسیون غشایی استفاده می شود.

محدودیت های محیط کشت مانیتول سالت آگار

• چندین گونه استافیلوکوک به غیر از اورئوس مانیتول مثبت هستند و کلنی های زرد رنگی را ایجاد می کنند که توسط مناطق زرد در این محیط احاطه شده اند (مانند S. capitis، S. xylosus، S. cohnii، S. sciuri، S. simulans، و گونه های دیگر). بنابراین، آزمایشات بیوشیمیایی بیشتری برای شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس یا گونه های دیگر ضروری است.
• بیشتر ارگانیسم‌های غیر از استافیلوکوک‌ها با غلظت بالای نمک موجود در مانیتول سالت آگار به جز برخی از موجودات دریایی هالوفیل مهار می‌شوند.
• برخی از سویه های استافیلوکوکوس اورئوس ممکن است تخمیر تاخیری مانیتول را نشان دهند. پلیت های منفی قبل از دور ریختن باید دوباره در یک شب انکوبه شوند.
• استافیلوکوکوس اورئوس احتمالی باید با آزمایش کواگولاز تایید شود.

تفسیر نتایج روی محیط MSA

مطالب مفید:

“کیمیا زیست گستر نوین” در راستای ارتقاء تولیدات و سطح علمی کشور مبادرت به واردات و توزیع مواد شیمیایی و مصرفی آزمایشگاهی کرده است. هدف مجموعه ما تأمين مواد و تجهيزات مورد نياز در بخش هاى مختلف آزمايشگاهى، تحقيقاتى، بيمارستانى، صنعتى و … مي باشد.