محیط کشت مک کانکی آگار

Ⅰ. بررسی اجمالی محیط کشت مک کانکی آگار

Ⅱ. آماده‌سازی / ترکیب

Ⅲ. اصل و تفسیر MacConkey آگار

Ⅳ. انواع محیط MacConkey

1.  مک کانکی با سوربیتول
2.  مک کانکی بدون کریستال ویولت و بدون نمک

Ⅴ. سوالات متداول

Ⅰ. بررسی اجمالی MacConkey agar

• MacConkey Agar یک آگار جامد، انتخابی و متمایز است که فقط گونه های باکتریایی گرم منفی را پرورش می دهد، می تواند ارگانیسم های گرم منفی را بر اساس متابولیسم لاکتوز آنها تمایز بیشتری دهد:
• تخمیر کننده های لاکتوز، کلنی ها، در MacConkey آگار قرمز یا صورتی می شوند
• مواد تخمیری تغییر رنگ نمی دهند.
• سرعت رشد، سرعت تخمیر لاکتوز، و وجود یا عدم وجود کپسول نیز راه هایی برای تمایز بیشتر ارگانیسم ها در آگار MacConkey هستند.
• محیط macConkey توسط Alfred Theodore MacConkey در سال 1900 توسعه یافت.

Ⅱ. آماده‌سازی / ترکیب

1. مواد را به طور جداگانه با توجه به حجم محیط وزن کنید. (در اینجا ما 1 لیتر از رسانه را در نظر می گیریم).
2. مواد (به جز آگار) را در یک لیوان شیشه ای حاوی حدود 900 میلی لیتر آب مقطر معلق کنید.
3. با استفاده از همزن مغناطیسی اجزا را در لیوان حل کنید. (برای حل کامل محیط، ممکن است حرارت اعمال شود).
4. pH محیط را به مقدار دلخواه تنظیم کنید.
5. محیط را با استفاده از آب مقطر در حجم نهایی 1 لیتر تنظیم کنید
6. محیط را به یک فلاسک مخروطی شکل یا مقدار کمی به حجم های کوچکتر منتقل کنید.
7. حالا آگار را متناسب با حجم محیط اضافه کنید (یعنی 13.5 گرم آگار برای 1 لیتر از محیط).
8. دهانه فلاسک را با یک پلاگین پنبه ای ببندید. آن را با کاغذ و یک نوار لاستیکی بیشتر ببندید.
9. اتوکلاو به مدت 20 دقیقه در 15 psi (1.05 کیلوگرم بر سانتی متر مربع) در چرخه مایع.
10. با این حال، اگر قرار است آنتی‌بیوتیک‌ها گنجانده شوند، محلول‌های موجود آنها باید قبل از افزودن به محیط، استریل شوند. این آنتی بیوتیک ها باید پس از سرد شدن محیط در حدود 45-50 درجه سانتیگراد اضافه شوند.
11. خوب مخلوط کنید و در صفحات پتری یا لوله های استریل برای شیب دار بریزید.
12. تا زمان استفاده به صورت وارونه (با درپوش پایین) در دمای 2-8 درجه سانتیگراد نگهداری شود.

همچنین می توانید محیط مک کانکی آگار آماده را از تامین کنندگان تجاری خریداری کنید.

◈ لاکتوز موجود در محیط را می توان با قندهای دیگر جایگزین کرد: MacConkey با سوربیتول.

◈ گونه ای از MacConkey آگار بدون کریستال ویولت و نمک می تواند برای محدود کردن ازدحام گونه های Proteus spp استفاده شود.

احتیاط

پس از تنظیم pH محیط، آگار را اضافه کنید. در PH اسیدی، آگار هیدرولیز شده و منجر به ایجاد صفحات نرم آگار می شود.

نکات محیط کشت مک کانکی آگار

برای درک نحوه عملکرد MacConkey agar، اجازه دهید ابتدا نقش مواد مختلف را ببینیم.

• آگار: عامل انجماد.
• NaCl: متعادل کننده اسمزی.
• پپتون: منبع نیتروژن، همچنین به عنوان منبع کربن برای باکتری هایی که نمی توانند قندها را متابولیزه کنند، عمل می کند.
• نمک های صفراوی: با ایجاد اختلال در غشاها، رشد باکتری های گرم مثبت را مهار می کنند. گونه های گرم منفی که در روده بزرگ زندگی می کنند می توانند در برابر اثرات منفی نمک صفراوی مقاومت کنند.
• کریستال ویولت: با ایجاد ضایعات DNA از رشد باکتری های گرم مثبت جلوگیری می کند.
• قرمز خنثی: نشانگر PH که مانند کاغذ تورنسل عمل می کند. هنگامی که PH به زیر 6.8 می رسد به قرمز/صورتی تبدیل می شود.
• لاکتوز: قندی که به عنوان منبع کربن عمل می کند. برخی از باکتری ها لاکتوز مصرف می کنند و اسید تولید می کنند (خمیر کننده لاکتوز). هنگامی که اسیدها در محیط اطراف آزاد می شوند، pH محیط کاهش می یابد.

Ⅲ. اصل و تفسیر MacConkey آگار

MacConkey Agar یک محیط انتخابی و متمایز است که برای جداسازی و تمایز باسیل‌های گرم منفی non-fastidious، به ویژه اعضای خانواده Enterobacteriaceae و جنس Pseudomonas استفاده می‌شود.

◈ انتخاب پذیری: رنگ کریستال  ویولت و bile salts رشد باکتری های گرم مثبت را متوقف می کنند. این فقط به گونه‌های گرم منفی که دارای غشای بیرونی نسبتاً مقاوم در برابر صفرا هستند اجازه می‌دهد تا کلنی‌هایی در MacConkey آگار تشکیل دهند.

◈ تمایز: باکتری های گرم منفی که در محیط MacConkey رشد می کنند با توانایی آنها در تخمیر لاکتوز متمایز می شوند.

باکتری‌هایی که لاکتوز را تخمیر می‌کنند PH محیط را کاهش می‌دهند، این کاهش با قرمز خنثی تشخیص داده می‌شود (اگر pH کمتر از 6.8 باشد قرمز می‌شود). هنگامی که PH کاهش می یابد، رنگ قرمز خنثی توسط باکتری ها جذب می شود که به صورت کلنی های صورتی روشن تا قرمز روی آگار ظاهر می شوند: اشریشیا کلی، انتروباکتریا، کلبسیلا.

باکتری های گرم منفی که در MacConkey آگار رشد می کنند اما لاکتوز را تخمیر نمی کنند در محیط بی رنگ به نظر می رسند و آگار اطراف باکتری نسبتاً شفاف باقی می ماند: سالمونلا، پروتئوس، یرسینیا، سودوموناس.

نکات

باکتری های گرم مثبت هیچ کلونی روی محیط کشت مک کانکی آگار تشکیل نمی دهند (به استثنای چند مورد).

⚡ باکتری‌هایی با تخمیر لاکتوز قوی، اسید کافی برای رسوب نمک‌های صفراوی تولید می‌کنند که در نتیجه هاله صورتی در محیط اطراف کلنی‌های فردی یا مناطق رشد متقابل ایجاد می‌شود.

⚡ تخمیر کننده های ضعیف لاکتوز کندتر از بقیه کلنی ها را تشکیل می دهند. مثال: Serratia, Citrobacter

⚡ تخمیر کننده های لاکتوز کند ممکن است به صورت کلونی های بی رنگ ظاهر شوند. مثال: Enterobacter

⚡ باکتری کپسوله شده با استفاده از لاکتوز کپسول تولید می کند. این منجر به ایجاد کلنی های چسبناک و مرطوب می شود. مثال: Klebsiella, Enterobacter

Ⅳ. انواع محیط کشت مک کانگی آگار

1- مک کانکی با سوربیتول (محیط کشت مک کانکی آگار حاوی سوربیتول (SMAC))

• این محیط به جای لاکتوز از D-sorbitol برای جداسازی و تمایز سروتیپ های انتروپاتوژن E. coli که تمایل به سوربیتول منفی دارند، استفاده می کند.
• E. coli O157: H7 (EHEC) سوربیتول منفی است و کلنی ها بی رنگ به نظر می رسند، در حالی که سویه های دیگر E. coli سوربیتول را تخمیر می کنند و به صورت کلنی های صورتی با حساسیت 100٪ و ویژگی 85٪ ظاهر می شوند.

2- مک کانکی بدون کریستال ویولت و نمک

کلرید سدیم از محیط خارج می شود تا محیطی با کمبود الکترولیت فراهم شود و از انتشار گونه های پروتئوس جلوگیری کند. علاوه بر این، این محیط حاوی کریستال بنفش نیست که اجازه رشد استافیلوکوک، انتروکوک و مایکوباکتریوم را می دهد.

Ⅴ. سوالات متداول

سوال: چرا از MacConkey آگار برای کشت ادرار استفاده می شود؟
پاسخ: آگار Macconkey امکان انتخاب و تمایز مستقیم گرم منفی میله ای را از نمونه ادرار، که شامل بیشتر باکتری های مسئول عفونت های دستگاه ادراری است، می دهد.

سوال: آیا سالمونلا در MacConkey رشد می کند؟
پاسخ: بله، سالمونلا می تواند در MacConkey رشد کند، سالمونلا از لاکتوز (کلنی های بی رنگ) استفاده نمی کند.

سوال: E. coli چگونه در MacConkey آگار ظاهر می شود؟
پاسخ: E coli با تخمیر لاکتوز pH را کاهش داده و رنگ را به صورتی تا صورتی تیره تغییر می دهد.

سوال: آیا شیگلا در MacConkey رشد می کند؟
پاسخ: بله، شیگلا می تواند در MacConkey رشد کند، شیگلا از لاکتوز (کلنی های بی رنگ) استفاده نمی کند.

سوال: آیا MacConkey انتخابی است یا افتراقی؟
پاسخ: MacConkey آگار انتخابی و افتراقی است

سوال: چه چیزی محیط کشت مک کانکی آگار را انتخابی می کند؟
پاسخ: رنگ بنفش کریستال و نمک های صفراوی رشد باکتری های گرم مثبت را متوقف می کنند.

مطالب مفید:

“کیمیا زیست گستر نوین” در راستای ارتقاء تولیدات و سطح علمی کشور مبادرت به واردات و توزیع مواد شیمیایی و مصرفی آزمایشگاهی کرده است. هدف مجموعه ما تأمين مواد و تجهيزات مورد نياز در بخش هاى مختلف آزمايشگاهى، تحقيقاتى، بيمارستانى، صنعتى و … مي باشد.