تست ارلیخ

تست ارلیخ یک آزمایش بیوشیمیایی است که برای تشخیص اسید آمینه، تریپتوفان، در یک نمونه پروتئین استفاده می شود. تست ارلیخ نیز به نام آزمایش p-dimethylamino benzaldehyde نامیده می شود که نام آن از معرف ارلیخ گرفته شده است. نام این آزمایش به نام پل ارلیش برنده جایزه نوبل گرفته شده است که این آزمایش را در هنگام تشخیص حصبه از اسهال ساده شناسایی کرد.

این آزمایش اسید آمینه خاص نیز نامیده می شود زیرا یک اسید آمینه خاص، تریپتوفان را تشخیص می دهد. این آزمایش در آزمایشگاه ها برای آزمایش های پزشکی، برخی برای آزمایش دارو و برخی دیگر برای تشخیص بیماری های مختلف استفاده شده است. تشخیص بیماری های کبدی، سندرم کارسینوئید، فرآیندهای همولیتیک و انسداد مجرای صفراوی مشترک نیز با آزمایش Ehrich قابل انجام است.

یکی از اشکال رایج تست ارلیخ، تست نقطه ای است که برای تشخیص ترکیبات روانگردان مانند تریپتامین ها و ارگولوئیدها (مانند LSD) استفاده می شود. یک آزمایش ارلیخ مثبت برای تریاک طبیعی به دست می آید زیرا حاوی تریپتوفان است. معرف Ehrlich همچنین برای شناسایی ایندول و اوروبیلینوژن (موجود در ادرار) استفاده می شود.

اهداف آزمون ارلیخ

1. برای تشخیص وجود تریپتوفان در یک نمونه مشخص.
2. برای تشخیص تیفوئید و اسهال.
3. برای شناسایی وجود اوروبیلینوژن در نمونه ادرار.

اصول آزمون ارلیخ

معرف Ehrlich از p-dimethylamino benzaldehyde تشکیل شده است. واکنشی که در آزمایش رخ می دهد بر این اصل استوار است که در شرایط اسیدی، معرف Ehrlich تحت تعویض الکتروفیلیک قرار می گیرد. این جایگزینی در حلقه ایندول یا بنزیل پیرول تریپتوفان رخ می دهد تا یک محصول متراکم بنفش آبی تولید کند. محصول تراکم تشکیل شده پس از واکنش با افزودن NaNO2 بیشتر افزایش می یابد.

واکنش

تریپتوفان + معرف ارلیخ (p-dimethylamino benzaldehyde) → محصول متراکم بنفش آبی

الزامات

معرف ها

• معرف ارلیش: معرف ارلیش با افزودن حدود 0.5 تا 2.0 گرم p-dimethylamino benzaldehyde در 50 میلی لیتر اتانول 95 درصد تهیه می شود. به این، 50 میلی لیتر H2SO4 10% اضافه می شود.
• نمونه پروتئین
• HCl غلیظ
• NaNO2

مواد مورد نیاز

• لوله های آزمایش
• پایه لوله آزمایش
• پیپت ها

مراحل انجام آزمون ارلیخ

1. حدود 3-4 میلی لیتر محلول پروتئین رقیق شده یا نمونه ادرار به یک لوله آزمایش اضافه می شود.
2. سپس مایع را با 1 میلی لیتر HCl غلیظ می جوشانند.
3. چند قطره از معرف Ehrlich به لوله آزمایش اضافه می شود.
4. سپس لوله آزمایش تکان داده می شود تا محتویات به درستی با هم مخلوط شوند.
5. لوله آزمایش برای تغییر رنگ مشاهده می شود. اگر رنگ آبی مایل به بنفش مشاهده شد، چند قطره محلول NaNO2 به لوله آزمایش اضافه می شود تا رنگ آبی به دست آید.

نتیجه و تفسیر آزمون ارلیخ

• نتیجه مثبت:

نتیجه مثبت در تست ارلیخ با ظاهر شدن رنگ قرمز تا بنفش یا آبی-بنفش مشخص می شود. سپس با افزودن NaNO2 رنگ به آبی تغییر می کند. این نشان می دهد که نمونه حاوی تریپتوفان است.

• نتیجه منفی:

نتیجه منفی در آزمایش ارلیچ با عدم وجود رنگ آبی-بنفش در اضافه کردن معرف ارلیخ نشان داده می شود. این نشان می دهد که نمونه حاوی تریپتوفان نیست.

کاربرد

• این آزمایش یک تست آلدهیدی است که برای تشخیص تریپتوفان در نمونه پروتئین استفاده می شود.
• این آزمایش برای تشخیص بیماری هایی مانند حصبه و سایر اختلالات فرآیند همولیتیک انسداد مجرای صفراوی مشترک استفاده می شود.
• این آزمایش همچنین می تواند برای تشخیص ترکیبات روانگردان و داروهایی مانند تریپتامین ها و ارگولوئیدها استفاده شود.
• تست ارلیخ وجود ایندول و اوروبیلینوژن را تشخیص می دهد. وجود اوروبیلینوژن در غلظت بالا در نمونه ادرار به تشخیص زردی کبدی و هپاتیت کمک می کند.

محدودیت ها

• واکنش منفی کاذب ممکن است در حضور عفونت ادراری رخ دهد زیرا نیتریت ها اوروبیلینوژن را به اوروبیلین اکسید می کنند.
• نتیجه منفی کاذب در طول درمان با آنتی بیوتیک، زیرا برخی از باکتری های روده که اوروبیلینوژن تولید می کنند ممکن است از بین بروند.
• این آزمایش یک آزمایش خاص برای آلدهید یا تریپتوفان است و اسیدهای آمینه یا پروتئین های دیگر را تشخیص نمی دهد.