محیط کشت سه قندی آهن دار

Ⅰ. بررسی اجمالی محیط کشت سه قندی آهن دار

Ⅱ. اصول

Ⅲ. ترکیب TSI agar

Ⅳ. تفسیر TSI آگار

Ⅰ. بررسی اجمالی محیط کشت سه قندی آهن دار

اکثر باکتری ها توانایی تخمیر کربوهیدرات ها، به ویژه قندها را دارند. در میان آنها، هر باکتری می تواند فقط برخی از قندها را تخمیر کند، در حالی که نمی تواند بقیه قندها را تخمیر کند. بنابراین، قندهایی که یک باکتری می تواند تخمیر کند و قندهایی که نمی تواند از ویژگی های باکتری است و بنابراین معیار مهمی برای شناسایی آن است. در سال 1940 سولکین، ویلت و هاجنا یک محیط سولفات آهن سه قندی را برای شناسایی باسیل های روده توصیف کردند. محیط کشت سه قندی آهن دار حاوی آگار برای شناسایی احتمالی انتروباکتریاسه بر اساس تخمیر گلوکز، لاکتوز، ساکارز و تولید گاز و H2S استفاده می شود. محیط سه قند آهن آگار دار حاوی سه کربوهیدرات (گلوکز، لاکتوز و ساکارز) است.

آزمایش آهن قند سه گانه (TSI) یک آزمایش میکروبیولوژیکی است که به دلیل توانایی آن در آزمایش توانایی یک میکروارگانیسم در تخمیر قندها و تولید سولفید هیدروژن نامگذاری شده است.

هدف: تعیین توانایی یک موجود زنده در تخمیر گلوکز، لاکتوز و ساکارز و توانایی آنها برای تولید سولفید هیدروژن.

Ⅱ. اصول

هنگامی که یکی از کربوهیدرات ها تخمیر می شود، کاهش pH باعث می شود که محیط از نارنجی مایل به قرمز (رنگ اصلی) به زرد تبدیل شود. رنگ قرمز تیره نشان دهنده قلیایی شدن پپتون ها است. تیوسولفات سدیم در محیط توسط برخی از باکتری ها به سولفید هیدروژن (H2S) کاهش می یابد، واکنش دومی با یون های آهن در محیط واکنش می دهد تا سولفید آهن، یک رسوب نامحلول سیاه، تولید کند.

Ⅲ. ترکیبات محیط کشت سه قندی آهن دار

سه کربوهیدرات محیط کشت حاوی: گلوکز (0.1٪)، ساکارز (1٪) و لاکتوز (1٪) + (عصاره گوشت گاو، مخمر، و پپتون …) + فنل قرمز به عنوان شاخص pH. در حین آماده سازی، لوله های حاوی آگار مذاب کج می شوند. این تمایل باعث می شود که متابولیسم هوازی در شیب و بی هوازی در پلت وجود داشته باشد.

برای 1 لیتر محیط:

– عصاره مخمر اتولیتیک …..3,0 گرم
– عصاره گوشت ….3,0 گرم
– پپتون …..20،0 گرم
– کلرید سدیم ….5,0 گرم
– لاکتوز …10،0 گرم
– ساکارز …..10,0 گرم
– گلوکز …1,0 گرم
– تیوسولفات سدیم….0،3 گرم
– سیترات آهن (III) …..0،3 گرم
– فنل قرمز … 24,0 میلی گرم
– آگار باکتریولوژیک …..9,0 گرم

آماده‌سازی محیط کشت

  1. مواد را با هم ترکیب کرده و pH را روی 7.3 تنظیم کنید.
  2. بجوشانید تا آگار حل شود.
  3. آن را در لوله ها پخش کنید.
  4. با اتوکلاو در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل کنید.
  5. در حالت مایل خنک کنید تا یک پلت 2.5 سانتی متری و یک شیب 3.8 سانتی متری ایجاد کنید.

محیط کشت سه قندی آهن دار به صورت تجاری نیز موجود است.

روش کشت محیط TSI agar

  1. با یک سوزن تلقیح مستقیم استریل شده، بالای کلنی ایزوله شده را لمس کنید.
  2. آگار TSI را ابتدا با ضربه زدن از مرکز محیط به پایین لوله و سپس رگه زدن روی سطح مایل آگار تلقیح کنید.
  3. درپوش را شل بگذارید و لوله را در دمای 35 درجه سانتیگراد در هوای محیط به مدت 18 تا 24 ساعت انکوبه کنید.

Ⅳ. تفسیر TSI آگار

  • اگر باکتری فقط از گلوکز استفاده می کند: پایین آن زرد و شیب قرمز می شود

توضیح: باکتری به سرعت گلوکز را متابولیزه می کند و در ابتدا شیب اسیدی و کف اسیدی با تولید پیرووات ایجاد می کند، پس از انکوباسیون بیشتر (18 ساعت)، گلوکز مصرف می شود و مانند باکتری ها که نمی توانند از لاکتوز و ساکارز استفاده کنند، از پپتون ها (اسیدهای آمینه) به عنوان یک منبع انرژی هوازی (شیب) استفاده می شوند که باعث آزاد شدن آمونیاک (NH3) افزایش pH، خاموش کردن نشانگر pH، فنل رد، از زرد به قرمز می شود.

  • اگر باکتری از گلوکز، ساکارز و / یا لاکتوز استفاده کند: پایین و شیب زرد می شود.

توضیح: پس از مصرف گلوکز، باکتری به مصرف ساکارز و یا لاکتوز ادامه می دهد که شیب زرد و ته آن زرد می شود. نکته: اگر محیط بیشتر، بیش از 48 ساعت انکوبه شود، لاکتوز و ساکارز کاهش می‌یابد و به دلیل متابولیسم پپتون به pH قلیایی بازمی‌گردد.

  • باکتری از هیچ یک از قندها استفاده نمی کند: در این صورت باکتری ها پپتون ها را مصرف می کنند.

با 2 مورد: اگر باکتری بتواند پپتون ها را به صورت هوازی و بی هوازی متابولیزه کند، شیب و پلت قرمز می شود – اگر پپتون ها فقط به صورت هوازی متابولیزه شوند، شیب قرمز خواهد بود و پایه هیچ تغییری نشان نخواهد داد.

سایر تفاسیر

  • تولید گاز

تولید گاز (CO2 و O2) با تقسیم (جدا شدن) آگار تشخیص داده می شود.

  • تولید H2S

رسوب سیاه نشان می دهد که باکتری ها قادر به تولید سولفید هیدروژن (H2S) از تیوسولفات سدیم بودند. از آنجایی که H2S بی رنگ است، سیترات آمونیوم آهن به عنوان شاخص تشکیل سولفید آهن نامحلول استفاده می شود.

تشکیل H2S نیاز به یک محیط اسیدی دارد. این بدان معنی است که حتی اگر رنگ پلت به دلیل تیره شدن محیط قابل مشاهده نباشد، باکتری گلوکز (+) است زیرا اگر مصرف گلوکز و اسیدی شدن محیط وجود نداشته باشد، تشکیل H2S انجام نمی شود.

محیط کشت سه قندی آهن دار
A: acid - ALK: alkaline - G: gas +: positive - w: weak.
ALK/A, H2S(w)+ALK/A, G, H2SALK/A, GALK/AA/A, G, H2S+A/A , G
Salmonella enterica serotype Typhi.Citrobacter spp
Edwardsiella tarda
Proteus mirabilis
Salmonella serovars other than S. enterica serovar Typhi and Paratyphi
Escherichia coli
.Citrobacter spp
.Enterobacter spp
Hafnia
.Klebsiella spp
Proteus myxofaciens
Providencia alcalifaciens
Salmonella enterica serovar Paratyphi
.Serratia spp
Yersinia kristensenii
Escherichia coli
Morganella
Proteus penneri
.Providencia spp
.Serratia spp
.Shigella spp
.Yersinia spp
.Citrobacter spp
Proteus vulgaris
.Citrobacter spp
Cronobacter
Enterobacter
Escherichia coli
.Klebsiella spp
Pantoea
Yersinia spp

موارد استفاده محیط کشت سه قندی آهن دار

  • این آزمایش عمدتاً برای تمایز اعضای خانواده انتروباکتریاسه از سایر میله های گرم منفی استفاده می شود.
  • همچنین در تمایز بین انتروباکتریاسه ها بر اساس الگوهای تخمیر قند آنها استفاده می شود.

محدودیت ها

  1. توصیه می شود برای شناسایی کامل، آزمایش بیوشیمیایی، ایمونولوژیک، مولکولی یا طیف سنجی جرمی روی کلنی های حاصل از کشت خالص انجام شود.
  2. ضربه زدن به لبه محیط کشت مهم است. عدم ضربه زدن به قنداق این آزمایش را باطل می کند. یکپارچگی آگار باید هنگام ضربه زدن حفظ شود. در حین این آزمایش
  3. باید درپوش ها شل شوند وگرنه نتایج اشتباهی رخ می دهد.
  4. TSI آگار باید در دوره انکوباسیون 18-24 ساعته خوانده شود. اگر خیلی زود خوانده شود، ممکن است واکنش مثبت کاذب مشاهده شود. اگر بعد از 24 ساعت خوانده شود، ممکن است واکنش منفی کاذب مشاهده شود.
  5. ارگانیسمی که سولفید هیدروژن تولید می کند ممکن است تولید اسید در ته محیط را بپوشاند. با این حال، تولید سولفید هیدروژن نیاز به یک محیط اسیدی دارد، بنابراین بخش لب به لب باید اسید در نظر گرفته شود.
  6. TSI در تشخیص سولفید هیدروژن در مقایسه با سایر محیط‌های حاوی آهن، مانند محیط سولفید ایندول (SIM) حساس نیست.
  7. گونه‌ها یا سویه‌های خاص ممکن است واکنش‌های تاخیری ایجاد کنند یا به طور کامل در تخمیر کربوهیدرات به روش ذکر شده شکست بخورند.

مطالب مفید:

کیمیا زیست گستر نوین” در راستای ارتقاء تولیدات و سطح علمی کشور مبادرت به واردات و توزیع مواد شیمیایی و مصرفی آزمایشگاهی کرده است. هدف مجموعه ما تأمين مواد و تجهيزات مورد نياز در بخش هاى مختلف آزمايشگاهى، تحقيقاتى، بيمارستانى، صنعتى و … مي باشد.